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SGI-DNA CE1000-50K 說明書

 更新時間:2017-11-14 點擊量:1843

世界*實驗材料供應商 SGI-DNA正式授權上海起發為其中國代理, SGI-DNA在一直是行業的*,一直為廣大科研客戶提供zui為的產品和服務,上海起發一直秉承為中國科研客戶帶來的產品,的服務,簽約 SGI-DNA就是為了給廣大科研客戶帶來更加完善的產品和服務,您的滿意將是我們zui大的收獲

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SGI-DNA是Synthetic Genomics,Inc(SGI)的全資子公司,成立于2013年,總部位于加利福尼亞州La Jolla。

SGI-DNA基于克雷格·文特爾(J.Craig Venter),漢密爾·史密斯(Ham Smith),克萊德·哈奇森(Clyde Hutchison),丹·吉布森(Dan Gibson)及其團隊 等科學家的科學進步和突破,利用*的專有DNA技術生產復雜的合成基因和試劑。SGI-DNA還提供全面的基因組服務,包括全基因組測序,文庫設計和其他生物信息服務。

SGI-DNA負責SGI合成DNA業務的所有商業方面,并專注于與學術和商業研究人員的戰略業務關系。

XactEdit™ Cas9 Nuclease with NLS

含有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶

使用這種高度純化的酶,進行有針對性的指導RNA指導的雙鏈DNA切割。帶有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶是一種含有核定位信號(NLS)的純化的重組化膿性鏈球菌(Streptococcus pyogenes) Cas9蛋白。當與適當設計的引導RNA(gRNA)復合時,XactEdit™Cas9核酸酶介導位點特異性的靶向雙鏈DNA切割。將Cas9:gRNA復合物(RNP)引入細胞產生雙鏈DNA斷裂(DSB),其已經用于多種靶向基因組編輯研究,例如同源敲入和基因敲除。

XactEdit™Cas9核酸酶可作為試劑盒或作為獨立的酶使用,濃度為1 mg / mL或10 mg / mL,可配制的導向RNA(gRNA)靶向DNA消化。純化至> 90%均一性,XactEdit™Cas9不顯示非特異性核酸酶活性。這些性能,以及低內毒素水平,使XactEdit™Cas9成為各種應用的理想選擇。XactEdit™酶可用于體外切割分析,或通過電穿孔或轉染引入細胞以靶向基因組序列。與載體或基于mRNA的Cas9系統不同,XactEdit™Cas9 RNP復合物不需要轉錄或翻譯,可以在進入細胞后立即行動。

概要

  •  高度純化 - 通過反相HPLC和SDS-PAGE純度大于90%
  • 高活性的質量控制 - 通過體外活性測定進行批量測試
  •  沒有非特異性DNA酶或RNA酶活性
  •  低內毒素水平 - 通過LAL測定小于0.01 EU /μg
  •  含有核定位信號(NLS)以有效地靶向細胞核
  •  可用于1 mg / mL和10 mg / mL濃度

 

具有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶顯示出高水平的體外活性

體外活性使用不同量的XactEdit™Cas9核酸酶(NLS)和gRNA

圖2. 使用不同量的XactEdit™Cas9核酸酶(NLS)和gRNA的體外活性。為了確定使用的XactEdit?Cas9核酸酶和gRNA的zui有效量,進行體外活性測定。在每條泳道中,將100ng對應于同源框轉錄因子Emx1的770bp DNA片段與量的XactEdit TM Cas9蛋白和gRNA一起溫育。XactEdit™Cas9:gRNA復合物的特異性切割產生兩個片段(283 bp和487 bp)。數據表明,XactEdit?Cas9蛋白使用不同量的輸入酶和gRNA有效地和特異性地切割靶位點處的底物。泳道1中顯示的分子量(MW)標記是1kb梯。

具有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶顯示出高度一致的體內核酸酶活性

與其他市售Ca9(NLS)核酸酶相比,含有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶的體內活性

圖3. 具有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶與其他市售Cas9(NLS)核酸酶相比的體內活性。體內將兩種不同批次的XactEdit TM Cas9核酸酶的核酸酶活性與來自供應商T和N的Cas9核酸酶的核酸酶活性進行比較。對于每個測定,使用1μgCas9和200ng體外轉錄的指導RNA形成Cas9:gRNA復合物, Emx1基因。通過電穿孔將復合物引入HEK 293T細胞。通過突變檢測分析(圖A,左)和MiSeq TM分析(圖B,右)檢查Cas9雙鏈斷裂(DSB)頻率。在圖A中,由DSB產生的序列在瓊脂糖凝膠電泳中顯示為裂解產物,表明Cas9誘導的DSB位點。泳道1和8是分子量(MW)標記(來自New England Biolabs的Quick-Load 2-Log DNA ladder)。在圖B中,靶位點的MiSeq TM測序的定量分析顯示為轉染細胞裂解的百分比。

高度純化,以確保可靠,一致,具體的核酸酶活性

與其他市售Ca9(NLS)核酸酶相比,含有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶的體內活性

圖4. XactEdit™Cas9的反相HPLC分析。使用反相HPLC分析10μgXactEdit TM Cas9。Zorbax 300SB-C3柱,流動相A =在水中的0.1%TFA,流動相B =在乙腈中的0.1%TFA,在1.0mL / min,40℃,214nm檢測下梯度= 5-100%B 30分鐘。

XactEdit™Cas9的反相HPLC分析

圖5.還原XactEdit™Cas9的SDS-PAGE。使用還原性SDS-PAGE分析XactEdit Cas9。4-15%Bio-Rad TGX凝膠,Bio-Rad Precision Plus蛋白標記,SYPRO-Orange染色。

對XactEdit™Cas9進行批量活動比較

圖6. XactEdit™Cas9的批次到批次活動比較 使用針對5.5kb目標設計的三種不同指導RNA(gRNA-1,gRNA-2和gRNA-2)比較兩種不同批次的XactEdit™Cas9的活性的體外活性測定。gRNA-SC是不識別目標DNA的混雜的陰性對照RNA。XactEdit™Cas9酶的存在或不存在分別由+和 - 表示。通過瓊脂糖凝膠電泳分析樣品以分離模板DNA(5.5kb,未切割)和消化產物(可變尺寸)。

 

ProductsCatalog #Pack Size
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) kit
Includes 10X XactEdit™ Digestion Buffer, Template for scrambled gRNA, Nuclease-free water
CE1000-50K50 µg
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) 1 mg/mLCE1000-5050 µg
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) 1 mg/mLCE1000-2505 x 50 µg
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) 10 mg/mLCE1001-250250 µg
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) 10 mg/mLCE1001-10001000 µg

 

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