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Worthington組織消化指南
引言
組織消化酶主要用于組織培養(yǎng)和細(xì)胞生物學(xué)研究的原代細(xì)胞的分離和收集。盡管這些消化酶已經(jīng)普遍應(yīng)用多年，但是對其組織消化和細(xì)胞收集的作用機制卻沒有全面的理解。 由此導(dǎo)致的結(jié)果便是選擇一種消化方法大多是隨機選擇或基于過去的經(jīng)驗，而不是在*理解消化原理的基礎(chǔ)上選擇的消化方案，以及如何根據(jù)具體實驗?zāi)康男拚桨敢垣@得更好的實驗結(jié)果。
細(xì)胞分離程序的目的是zui大程度的獲得功能活性的單個細(xì)胞，而影響結(jié)果的原因有很多，包括（不限于）以下：
1、組織類型
2、物種來源
3、動物年齡
4、遺傳改造情況（如knockouts）
5、所用的消化培養(yǎng)液
6、所用的酶
7、消化酶中的雜質(zhì)
8、所用消化酶的工作濃度
9、溫度
10、孵育時間
通常前四個原因沒辦法選擇，而剩下的原因一般由經(jīng)驗決定以獲取zui適實驗結(jié)果。
通過查閱文獻來選擇*組織消化酶和zui適消化條件的研究人員通常被互相矛盾的實驗數(shù)據(jù)搞得一頭霧水。這些巨大差異來源于組織胞外基質(zhì)的復(fù)雜而動態(tài)的特性，以及過去常用的粗制、未提純的組織分離酶。另外，組織胞外基質(zhì)由各種蛋白、糖蛋白、脂類和糖脂組成，這些成分的組成比例在不同物種、不同組織、甚至不同發(fā)育（年齡）之間存在明顯的差異，這些因素都極大的影響了消化方案的制定。目前通常使用的粗制酶，如鏈霉蛋白酶、NF1:250、以及含有幾種其他不同濃度蛋白酶的膠原酶、以及各種多糖酶、核酶和脂酶。
本指南總結(jié)了目前常用組織消化酶的zui適消化和細(xì)胞收集知識和方法，描述了標(biāo)準(zhǔn)的實驗步驟， 以便于制定一個*的細(xì)胞分離方案，同時列舉了一些相關(guān)的參考文獻。
下表列出多種組織的適宜消化酶（含參考文獻，以組織類型和物種分類，詳見鏈接）
脂肪組織 | 腎上腺組織 | 骨組織 | 腦組織 |
軟骨組織 | 結(jié)腸組織 | 內(nèi)皮組織 | 上皮組織 |
眼 | 心臟 | 腸 | 腎 |
肝 | 肺 | 淋巴結(jié) | 乳腺 |
其它組織 | 其他組織 | 肌組織 | 神經(jīng)組織 |
胰腺 | 腮腺 | 垂體 | 前列腺 |
生殖 | 動物鱗片 | 皮膚 | 脾臟 |
干細(xì)胞 | 胸腺 | 甲狀腺/甲狀旁腺 | 扁桃體 |
腫瘤 |
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注：使用Worthington公司消化酶的文獻不限于上表鏈接中所列，一般而言，Worthington公司的組織消化酶可用于大多組織類型的消化。
胸腺組織消化手冊
| 物種 | 詳細(xì)來源 | 細(xì)胞名稱 | 消化用酶 | 培養(yǎng)基 | 參考文獻 |
| 人類 | 人類 | Dentritic | Collagenase Type 2: 0.1% | RPMI 1640 | Vandenabeele S, Hochrein H, Mavaddat N, Winkel K, Shortman K: Human thymus contains 2 distinct dendritic cell populations, Blood 97, 1733-41, 2001 |
| Deoxyribonuclease I: 0.002% | |||||
| 小鼠 | 小鼠 | Stromal | Collagenase Type 3: 0.2% | RPMI 1640 | Phillips, Joy, Brondstetter, T., English, C., Lee, H., Virts, E, and Thoman, M.: IL-7 Gene Therapy in Aging Restores Early thymopoiesis without Reversing Involution, J Immunol , 4869, 2004 |
| Hyaluronidase: 0.1% | |||||
| 小鼠 | 小鼠 | Dentritic | Collagenase Type 3: 0.1% | RPMI 1640 | Schiavoni, F, Mattei, F, Sestili, P, Borghi, P, Venditti, M, Morse, H, Belardelli, F, and Gabrieli, L: ICSBP is Essential for the Development of Mouse Type I Interferon-producing Cells and for the Generation and Activation of CD8a+ Dendritic Cells, J Exp Med 196, 1415, 2002 |
| Deoxyribonuclease I: 325 u/ml | |||||
| 小鼠 | 小鼠, 3-6 周 | Thymic | Collagenase Type 3: 100-400 u/ml | HBSS | Smith KM, Olson DC, Hirose R, Hanahan D: Pancreatic gene expression in rare cells of thymic medulla: evidence for functional contribution to T cell tolerance, Int Immunol 9, 1355-65, 1997 |
| 小鼠 | 小鼠 (BALB/c, C3H, C57BL/6), 1-28 天 | Epithelial, thymus | Neutral Protease: 1.5 礸/ml | DMEM | Ropke, C., van Deurs, B., and Petersen, O.: Short-term C*tion of Murine Thymic Epithelial Cells in a Serum-Free Medium, In Vitro Cell Dev Biol 26, 671, 1990 |
| 小鼠 | 小鼠, C3H, 16 周大, 雌性 | Epithelial | Collagenase Type 3: 0.1% | DMEM | Ehmann, U., Shiurba, R., and Peterson, W.: Long-Term Proliferation of Mouse Thymic Epithelial Cells in Culture, In Vitro Cell Dev Biol 22 (12), 738, 1986 |
| 小鼠 | Swiss小鼠, 6 周 | Thymus | Collagenase Type 3: 150 u/ml | DMEM | Jones, K. and Pierre, R.: Analysis of Cellular Heterogeneity in Mouse Thymus Cultures, In Vitro 17, 431, 1981 |
| 大鼠 | 大鼠,產(chǎn)后的 | Thymic | Trypsin: 0.05% | HBSS | Bonfanti, P., Claudinot, S., Amici, A., Farley, A., Blackburn, C. and Barrandon, Y.:Microenvironmental Reprogramming of Thymic Epithelial Cells to Skin Multipotent Stem Cells.,Nature 466, 978, 2010 |
| 大鼠 | 大鼠 | Thymic epithelial | Collagenase Type 3: 0.1% | DMEM | Masuda, A and Matsuyama, M: Epithelial Cell Lines From Rat Thymoma and Rat Thymus,Cell & Tissue Culture: Laboratory Procedures Vol. 2,Doyle, A., Griffiths, J., and Newell, D., John Wiley and Sons, Ltd., 21C:4.1, 1995 |
| 大鼠 | 大鼠 (ACI/NMs X BUF/Mna) F1, 雄性, 28 月 | Epthelial | Collagenase Type 3: 0.1% | Eagle's MEM Serum-free | Masuda, A., Ohtsuka, K., and Matsuyama, M.: Establishment of Functional Epithelial Cell Lines from a Rat Thyoma and a Rat Thymus, In Vitro Cell Dev Biol 26, 713, 1990 |
| 大鼠, (ACI/MNs) 雄性, 8 周 | |||||
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